تقنية لطخة ويسترن (Western Blot)

تُعد لطخة ويسترن (المعروفة أيضاً باسم البصمة المناعية للبروتين) واحدة من أكثر التقنيات التحليلية استخداماً في مجال البيولوجيا الجزيئية وعلم الوراثة المناعية. تُستخدم هذه التقنية للكشف عن بروتينات محددة في عينة من مستخلصات الأنسجة أو الخلايا، مما يسمح للعلماء بتمييز وقياس كمية البروتينات المختلفة ضمن مزيج بروتيني معقد.

كيف تعمل تقنية لطخة ويسترن؟

تعتمد هذه التقنية على ثلاثة عناصر أساسية لفصل بروتين معين عن مجموعة معقدة:

• الفصل حسب الحجم: يتم فصل البروتينات بناءً على وزنها الجزيئي باستخدام الرحلان الكهربائي.
• النقل: يتم نقل البروتينات المفصولة من الهلام (الجل) إلى دعامة صلبة (غشاء).
• الوسم: يتم تحديد البروتين المستهدف باستخدام أجسام مضادة أولية وثانوية لجعل البروتين مرئياً.

تستخدم التقنية جسماً مضاداً اصطناعياً أو مشتقاً من الحيوانات (الجسم المضاد الأولي) الذي يتعرف على البروتين المستهدف ويرتبط به. بعد غسل الغشاء لإزالة الأجسام المضادة الزائدة، يتم إضافة جسم مضاد ثانوي يرتبط بالجسم المضاد الأولي. يتم الكشف عن هذا الجسم المضاد الثانوي من خلال طرق مختلفة مثل الصبغ، أو الفلورة المناعية، أو النشاط الإشعاعي، مما يسمح بالكشف غير المباشر عن البروتين المستهدف.

تطبيقات لطخة ويسترن

تُستخدم هذه التقنية على نطاق واسع في الكيمياء الحيوية للكشف النوعي عن البروتينات الفردية وتعديلات البروتين (مثل تعديلات ما بعد الترجمة). وتُستخدم أيضاً في المجالات التالية:

1. التشخيص الطبي

تُستخدم لطخة ويسترن كاختبار تأكيدي في العديد من الحالات المرضية، منها:

• فيروس نقص المناعة البشرية (HIV): كانت تُستخدم سابقاً كاختبار تأكيدي للكشف عن الأجسام المضادة للفيروس في مصل الإنسان.
• مرض كرويتزفيلد جاكوب (vCJD): تُعد الاختبار الحاسم لتشخيص هذا النوع من أمراض البريون المرتبطة بـ "جنون البقر".
• داء التولاريميا: أظهرت التقنية حساسية تقارب 100% ونوعية عالية جداً.
• أمراض أخرى: تُستخدم في تشخيص داء لايم، والتهاب الكبد B، وفيروس الهربس البسيط من النوع الثاني (HSV-2).

2. مكافحة المنشطات

تستخدم الوكالة العالمية لمكافحة المنشطات (WADA) هذه التقنية للكشف عن المنشطات الدموية، مثل الإريثروبويتين (EPO)، الذي يُستخدم لزيادة كتلة خلايا الدم الحمراء وتحسين الأداء الرياضي. وقد تم تطبيق ذلك بشكل مكثف خلال أحداث رياضية كبرى مثل كأس العالم 2014.

تقنيات ذات صلة

ترتبط لطخة ويسترن بتقنيات أخرى تعتمد على الأجسام المضادة مثل تحليل لطخة النقطة (Dot Blot)، والكيمياء النسيجية المناعية، ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). أما من حيث التسمية، فإن اسم "ويسترن بلوت" جاء كنوع من التلاعب بالأسماء بعد "لطخة ساوثرن" (Southern Blot) المخصصة للكشف عن DNA، و"لطخة نورثرن" (Northern Blot) المخصصة للكشف عن RNA.